【导言】
专利名称为：一种区分甘蔗高贵种和割手密种胞质类型的SSR分子标记引物与应用（202410766270.7），涉及甘蔗分子育种技术领域。
【申请人】
申请人：广西大学
【案例简介】
我方代理师接到交底资料后，第一时间对技术方案进行梳理，发现本申请的技术原理相对简单，之后进行了初步检索，初步检索后发现，有关本申请提供的鉴定的方法的相关研究比较多，但具体的研究对象，以及研究的内容（区分甘蔗高贵种和割手密种胞质类型）在现有技术中比较少，从该方面进行检索，并未检索到与本申请相似的技术方案，因此，权利要求的重点落在了区分甘蔗胞质类型引物的开发，进一步进行深度检索结论相同。
于是对权利要求进行了如下布局：
1、一种区分甘蔗高贵种和割手密种胞质类型的SSR分子标记引物，其特征在于，所述引物为引物对1或引物对2；
所述引物对1为：
5’-CCTTGGCTTGGAAAGAGTGA-3’；如SEQ ID NO：15所示；
5’-GGGAAAGGATATCGATGGGT-3’；如SEQ ID NO：16所示；
所述引物对2为：
5’-TTGACCAGCATCAGGTATCG-3’；如SEQ ID NO：17所示；
5’-AAAAGAGGATCGCCCCTAGT-3’；如SEQ ID NO：18所示。
2、根据权利要求1所述的一种区分甘蔗高贵种和割手密种胞质类型的SSR分子标记引物，其特征在于，所述引物对1在线粒体基因组位置为割手密种1号染色体；所述引物对2在线粒体基因组位置为割手密种2号染色体。
3、权利要求1或2所述的区分甘蔗高贵种和割手密种胞质类型的SSR分子标记引物在甘蔗遗传分析或鉴定中的应用。
4、根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述甘蔗遗传分析或鉴定的方法，包括如下步骤：
（1）提取甘蔗品种的基因组DNA，用权利要求1或2所述引物对提取的基因组DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；
（2）对步骤（1）得到的扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳实验或琼脂糖凝胶电泳实验，根据条带位置判定为甘蔗高贵种或割手密种。
5、根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增反应体系为：总体系20μL，其中50 ng/μL DNA样品1μL、10μmol上游、下游引物各0.5μL、2×Rapid Taq Master Mix 10μL、双蒸水8μL。
6、根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增反应的程序为：
95℃预变性3min；95℃变性15s，56℃退火15s，72℃延伸10s，共34个循环；72℃最后延伸5min，4℃保存。
7、根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的步骤为：
配制9%聚丙烯酰胺凝胶；160V恒压电泳150min，进行PCR产物的分离；采用泡染法进行染色，在凝胶成像系统上进行拍照观察。
8、根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述琼脂糖凝胶电泳实验的步骤为：
配制3%琼脂糖凝胶；130V恒压电泳30min，进行PCR产物的分离；最后在凝胶成像系统上进行拍照观察。
文案递交不久，国家知识产权局在没有下发审查意见通知书的情况下，专利给予授权。综上，本申请的技术原理虽然简单，但本申请的研究对象-甘蔗，以及如何区分甘蔗高贵种和割手密种胞质类型的研究内容在现有技术中的相关研究较少，因此基于上述权利要求书布局，本发明在不下发审查意见的情况下直接拿下了授权。
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